STED超高分辨成像原理：利用损耗激光形成的光环包围和损耗掉埃利斑周围的衍射部分，只剩下中心点，实现分辨率的提升。

荧光标记选择：尽量使用短发射带宽的荧光蛋白（如GFP、mcherry）或Alexa Fluo系列的荧光标记。在需要多色荧光成像时采用序列扫描程序，但因同时存在多种荧光标记，其中不允许使用DAPI、Hoechst等发射带宽大的染料。染核可改用picogreen。

荧光信号要求：尽可能强和稳定，可同时配合抗淬灭剂。

物镜选择：只能使用STED专用的100x油镜和93x甘油镜，并使用70%以上甘油介质封片。低倍常规物镜无法做超高分辨率成像。

光源选择：必须使用脉冲光源，如白激光。

以AF488染料为例，可使用498nm激发，接收范围采用508-580nm，损耗光选择660nm

超高分辨率成像，需要在目标荧光标记的发射峰的尾端安排损耗激光。

激发光的波长尽量接近最大发射峰（本机激发光源采用白激光，波长可调谐）

荧光接收范围，起始波长为激发波长+10nm

提高超高分辨率成像分辨能力的渐进措施：

1、使用HyD检测器

2、使用门控成像

3、使用775nm脉冲损耗光成像

4、启用惠更斯软件逆卷积处理以进一步提高分辨率

本机的极限分辨率约41nm。