样品的正确放置是获得理想图像的前提。根据样品尺寸、厚度等因素,我们绘制了相应的示意图,上机之前请务必认真准备好,以免浪费已预约的机时。
1、植物叶片、根等厚度较大的片状或条状样品:
正置显微镜:多点固定、保持盖玻片水平、避免翘曲。
倒置显微镜:使用共聚焦专用薄底平皿承载。
2、胚、果蝇幼虫等颗粒状较厚材料:
正置显微镜:预包埋,保持盖玻片水平,保证角度和朝向
倒置显微镜:使用共聚焦专用薄底平皿承载,配合高透明phytagel凝胶、琼脂糖或明胶预包埋和调整朝向。
琼脂糖的制备:配制0.5-0.7%浓度的琼脂糖,倒入共聚焦专用平皿并在37℃ block上恒温孵育,放入样品并快速调整好方位后冷却到室温。
3、细胞爬片:
正置或倒置显微镜均要求:保持细胞面向上,另叠加盖玻片覆盖。
为维持等渗原则,此处PBS可用相同的细胞培养液、甘油溶液等代替。step1中添加的液体用于驱除气泡和吸合爬片,step3中的液体注入主要是为了维持盖玻片稳定,在含甘油粘合剂时,吸附力足够的话可以省略。爬片应品字型排列并均匀布局,避免盖玻片受液体张力影响局部吸合而造成上下或左右倾斜。
4、植物根等线状材料批量筛选 :
正置显微镜:用垫层支撑统一厚度,尽可能紧凑摆放以提高工作效率。
倒置显微镜:用共聚焦专用平皿承载,预先紧凑摆放好样品。
5、植物表型拍摄:
正置显微镜:尽量预先排列好样品,以提高处理一致性。
倒置显微镜:用共聚焦专用平皿预先贴底装载。
6、超厚不透明材料表面扫描
正置显微镜:预先固定样品,保证待测面水平。
倒置显微镜:直接放在共聚焦专用薄底平皿上。
7、烟草叶片、洋葱表皮
正置显微镜:弃去影响展平的结构
倒置显微镜:剪碎并挑选小面积样品,用少量水展平吸附在共聚焦专用平皿底面
8、35mm共聚焦专用平皿放置方式
正置显微镜:预先降低载物台1cm左右,载物台上放一张空白载玻片,平皿倒置放在载玻片上,调焦时要万分小心
倒置显微镜:载物台更换专用平皿适配器,平皿直接放在适配器上并加上压盖