实验技术
共聚焦显微镜(正置和倒置机型)样品放置要求
发布时间:2018年11月26日   作者:维护管理员    阅读次数:572

样品的正确放置是获得理想图像的前提。根据样品尺寸、厚度等因素,我们绘制了相应的示意图,上机之前请务必认真准备好,以免浪费已预约的机时。





1、植物叶片、根等厚度较大的片状或条状样品:

正置显微镜:多点固定、保持盖玻片水平、避免翘曲

倒置显微镜:使用共聚焦专用薄底平皿承载。1811260417583fd.png


2、胚、果蝇幼虫等颗粒状较厚材料: 

正置显微镜:预包埋,保持盖玻片水平,保证角度和朝向

倒置显微镜:使用共聚焦专用薄底平皿承载,配合高透明phytagel凝胶、琼脂糖或明胶预包埋和调整朝向。
琼脂糖的制备:配制0.5-0.7%浓度的琼脂糖,倒入共聚焦专用平皿并在37℃ block上恒温孵育,放入样品并快速调整好方位后冷却到室温。

1811260421235f7.png


3、细胞爬片

正置或倒置显微镜均要求:保持细胞面向上,另叠加盖玻片覆盖

为维持等渗原则,此处PBS可用相同的细胞培养液、甘油溶液等代替。step1中添加的液体用于驱除气泡和吸合爬片,step3中的液体注入主要是为了维持盖玻片稳定,在含甘油粘合剂时,吸附力足够的话可以省略。爬片应品字型排列并均匀布局,避免盖玻片受液体张力影响局部吸合而造成上下或左右倾斜。

18112604212380b.png


4、植物根等线状材料批量筛选 

正置显微镜:用垫层支撑统一厚,尽可能紧凑摆放以提高工作效率。

倒置显微镜:用共聚焦专用平皿承载,预先紧凑摆放好样品。


181126042123831.png


5、植物表型拍摄:

正置显微镜:尽量预先排列好样品,以提高处理一致性。

倒置显微镜:用共聚焦专用平皿预先贴底装载。


1811260421238d1.png


6、超厚不透明材料表面扫描 

正置显微镜:预先固定样品,保证待测面水平。

倒置显微镜:直接放在共聚焦专用薄底平皿上。

1811260421245ec.png


7、烟草叶片、洋葱表皮 

正置显微镜:弃去影响展平的结构

倒置显微镜:剪碎并挑选小面积样品,用少量水展平吸附在共聚焦专用平皿底面

181126042124de4.png 


8、35mm共聚焦专用平皿放置方式

正置显微镜:预先降低载物台1cm左右,载物台上放一张空白载玻片,平皿倒置放在载玻片上,调焦时要万分小心

倒置显微镜:载物台更换专用平皿适配器,平皿直接放在适配器上并加上压盖

18112605002655e.jpg