宁波永新光学提供国产NCF950激光共聚焦显微镜一台供所有用户免费试用,试用期3个月
该机将于3月2日完成配置后开放预约,供所有用户免费使用。
该机的数据为tiff格式,每次拍摄建立一个包含所有通道图像和配置文件的文件夹,数据可用Fiji等第三方软件打开和分析。
该机为纯国产设备,功能并不完善,但应付简单拍摄绰绰有余。我们会做好培训,欢迎有急迫采图需求的同学前来使用并提出宝贵意见和建议。
经初步测试,该机的主要问题在于预扫描速度较慢,拖动时图像有滞后感,部分操作需要手动切换。其它光学性能与现有设备差距不大。
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主要硬件参数:
可拍摄通道:DAPI、FITC、TRITC、CY5
激光器:405nm、488nm、561nm、640nm
检测器:400-750nm,3PMT+近红外/明场PMT
复消色差物镜:10x、20x、40x、60x
分辨率:512-4096
扫描速度:2帧/秒(512x512像素)
色深:16bit
可拍摄模式:4路荧光(含DIC明场)、z-stack、timelapse
输出文件格式:TIFF
使用方式:预约制,免费(1元/h)
请注意:
1、 该机为滤片型,不支持波长范围自由设定,只有处于4个滤片检测区间内的荧光标记才可以有效检测
2、 使用前须接受操作培训
3、 该机带CCD,可以作为宽场荧光显微镜使用,可拍摄通道与共聚焦模式相同
4、 推荐用途:简单拍摄和定性
附操作说明:
开机步骤:
按1-6顺序开启机器:
1、 主控制器(显微镜右侧桌面黑色机箱)
2、 电脑(桌下),开机后单击桌面Nomis-Advance.App
3、 激光器电源(左侧白色机柜圆形按钮按下)
4、 激光器开关ON
5、 激光器启动钥匙(向右扭转)
6、 汞灯(荧光观察用,可不开启)
显微镜控制
1、 打开明场:
聚光镜顶部手柄向右拉到底(手柄露出6cm),打开LED照明光闸
显微镜左侧调焦螺旋前上方水平拨盘拨到同心圆图标,使图像转向目镜
按动显微镜左侧调焦螺旋前FLU按钮切换滤色转盘,直至明场出现
照明亮度可通过转动显微镜正面基部拨盘调整
2、 移动载物台:
手柄控制
3、 调焦:
粗调/细调螺旋
4、 荧光观察和滤色片切换:
在汞灯打开的情况下,按动显微镜左侧调焦螺旋前FLU按钮切换到相应的蓝、绿、红滤色转盘
5、 物镜切换:
手动,右手拨动物镜转盘
共聚焦成像
1、通道设置
系统只能拍摄蓝、绿、红、近红外共4个通道,其中近红外通道兼做DIC明场通道用
蓝通道用于拍摄DAPI和Hoechst之类的细胞核标记
绿通道用于拍摄GFP、FITC之类的绿色荧光标记
红通道用于拍摄AF555、AF594、RFP、mCherry之类的红色荧光标记
近红外通道用于拍摄AF633、Cy5、叶绿素之类的近红外荧光标记,可切换用于DIC明场成像
本机不能区分荧光颜色相近或有串色的多种荧光标记,但可以尝试改用分时拍摄方式尽可能区分。
2、参数设定
HV:检测器灵敏度,值越高信号越强,应尽可能低
OFFSET:消背景用的偏移值,一般取0
波长值:点击启用相应激光器,滚动条为功率百分比
LUT:图像色彩饱和度调整,一般不建议调,或建议后期图像处理时再调整
3、启动拍摄前切换显微镜光路
显微镜左侧调焦螺旋前上方水平拨盘拨到箭头向左100图标,使图像转向扫描器
若需要拍明场,聚光镜顶部手柄向左推到底(手柄露出3cm),光路切换到明场/近红外检测器
4、Live预扫描
建议点曝光时间设为2us,图像大小512
5、Capture扫描
建议图像大小1024及以上
6、放大倍率
先通过控制手柄将目标移动至图像中心,然后点击相应的放大倍率
7、小孔
即针孔,值越小理论分辨率越高但信号强度减弱,值越大信号强度或灵敏度越高但图像会发虚。
文件管理
常规拍摄数据默认保存位置:D:\Nomis_Advance_ConfocalApp_0221\snap每次拍摄得到的图像自动保存于以日期时间命名的最新子目录中,目录中含有各通道图像、拼合图像、配置文件和16位原始数据目录
z-stack和timelapse数据自行定义请保存路径。
关机步骤
1、 关闭汞灯
2、 拷贝数据至U盘,关闭主控软件,关闭计算机
3、 激光器启动钥匙(向左扭转)
4、 激光器开关OFF
5、 激光器电源(左侧白色机柜圆形按钮按一下灭)
6、 主控制器(显微镜右侧桌面黑色机箱OFF)