7月17日,FV3000激光共聚焦显微镜的全功能培训已完成,即日起开放所有测试项目。请按实际需要的时间进行预约,并在预约时准确说明实验的内容和使用的荧光标记。
荧光标记应使用标记分子上实际发光的荧光基团表述,其中应包括细胞核染料等辅助标记:
比如看烟草叶片中融合GFP的某蛋白与细胞核或叶绿体的共定位关系,荧光染料为:DAPI、GFP、叶绿素
比如看细胞爬片中带AF488偶联的鼠抗兔荧光二抗标记的目标蛋白是否与线粒体(采用mitotracker red染色)共定位,染料为:DAPI、AF488、mitotracker red(不要只填“线粒体”或“鼠抗兔”)
FV3000为倒置显微镜,请注意:
体积较大的样品,仅靠加水或甘油难以依靠表面张力吸牢盖玻片,必须使用35mm或18mm规格的共聚焦专用薄底平皿承载,此类样品包括:
植物根、叶表皮细胞、胚胎、斑马鱼、爪蟾卵等。
为保证材料紧贴底面,加水量应尽可能少,避免漂浮失焦。同时,考虑到疏水排斥的可能性,应考虑选用玻璃底无包被的皿代替常用的塑料皿,或采用玻璃片压住的方法,或改预约双光子显微镜。基于实测经验,植物叶片包括烟草、拟南芥和洋葱表皮实验,不推荐使用倒置的FV3000拍摄。
细菌和单细胞藻类样品,液体加载量应根据盖玻片面积换算,20x20mm的盖玻片加液量不得超过8ul。若细胞活性大,需在培养液中添加16-50%终浓度的甘油增加粘度,以降低细胞运动速度,否则无法获得稳定图像。
细胞爬片,依然要求以3张以上爬片上覆盖额外盖玻片的方式制片,利用表面张力和三点固定的方式维持盖玻片稳定。
若坚持使用细胞爬片直接倒装制片,请注意爬片面向物镜的那个面务必清洁干燥,封片剂必须干透至爬片无法自由滑动,封片剂不得溢出或严重超越爬片所在平面,另外请注意操纵载物台移动时。物镜不得超越爬片边缘线以外。
所有拟上镜观察的样品,面向物镜的表面务必干燥、无任何液体沾染。低温保存的玻片应提前足够时间取出并平衡到室温。若实在需要临时除去凝结水迹,可用洁净吸水纸擦拭,或用无水乙醇脱水。
针对不同样品,FV3000可选装不同的载物台适配器,常备适配器包括平皿适配器和载玻片适配器,取下适配器后则可直接放置多孔板(包括2、6、12、24、48、96、384、1152孔板)
上图:35mm共聚焦平皿适配器,可兼容18mm皿,配有压块。 下图:标准载玻片适配器,玻片以四角弧形边承托,上下边缘略大于1英寸,故无法直接搁置盖玻片。
适配器左下方均有U形加液口,使用油镜时临时移动到该位置加油,然后调用载物台记忆自动返回原位。
本机还备有多种活细胞专用的chamber型载物台适配器,配合活细胞控制器和自动聚焦模块,供需要长时间拍摄及稳定温度和CO2浓度的活细胞实验之用。若需要使用,预约前请事先专门邮件联系仪器管理员,申请特例开放。 |
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