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FV3000激光共聚焦显微镜简明操作指南
发布时间:2019年07月23日   作者:Confocal-Admin    阅读次数:163

计算机初始操作:

到场刷卡上线后,首先在窗口右上角重定位数据保存目录(新建并设定为自己当天的数据目录,约定为D:\Olympus…\导师姓名\学生姓名缩写\日期\)并设定首个样品的主文件名

window菜单选close all images,关闭先前打开的所有图像

window菜单选default workspace,恢复默认窗口布局

若窗口最左边的扫描缩放zoom值不是1.00,请设置为1并回车。

若窗口最后series窗口启用了z-stacktimeseries,请将其设为off。

 

显微镜操作:

手持手柄处向后推开聚光镜支架,根据样品类型更换相应的载物台适配器。包括载玻片适配器、平皿适配器和无适配器(透明底细胞板),完成轻轻将聚光镜支架拉回原位。

将物镜切换到4x10x,对焦后逐级切换到20x并调焦清晰和寻找视野

光源可选择明场、荧光。为保护样品信号不致淬灭,荧光观察过程中可随时按调焦器中间的圆形shutter键切断和恢复照明。

 

若要使用油镜:

20x下找好视野后,直接切换为60x油镜。

在触屏控制器的stage面板中按set,记忆当前坐标,然后按escape回缩物镜。

移动载物台使物镜进入加油口,往物镜顶端添加数微升Olympus专用镜油。

stage面板的go键,载物台会自动返回原坐标。然后按escape使镜头自动复位。

使用细调焦使图像清晰。注意:一旦使用了油镜,请避免切换回20x40x物镜。

 

荧光通道设置和参数调整:

在界面左二窗口PMT setting中单击Dye&Detector Select进行荧光标记设定,双击添加或删除荧光标记,完成后系统会自动进行硬件设置。

将所有激光器的初始功率设定为1%,通过调整HV值提高信号灵敏度,注意HSD检测器的最高允许值为700SD检测器的最高允许值为800,当HV值接近最高限值依然感觉信号不足时,应改用适当调高激光功率的办法。注意,HV超出最高允许值后信号质量将明显下降,表现为噪点增加,应提高激光强度补偿信号不足。若激光功率调到100%后信号依然不足,可适当调大pinhole

 

预扫描操作:

预扫描时要养成使用Hi-Lo视图的习惯,确保图像不出现大面积的红色过曝点。

使用livelivex2livex4按钮启动预扫描,它们的区别在于采用逐行、隔行或隔3行扫描方式加速预扫描帧率,获得不同的反馈速度,一般采用最高的live x4

分别调整焦距和各项扫描参数使图像最佳。

预扫描模式下,可以通过双击图像中某细胞,使该细胞居中显示(此操作自动移动载物台),也可在图像窗口中用ctrl+鼠标滚轮,进行微调焦(此操作自动移动z轴)

 

扫描操作:

预扫描完成后,按界面右侧Acquire窗口上方的LSM start按钮进行图像扫描。结果文件会以四位数后缀自动保存于初始设置的保存目录。若更换样品,扫描前重新设定主文件名。