计算机初始操作：

到场刷卡上线后，首先在窗口右上角重定位数据保存目录（新建并设定为自己当天的数据目录，约定为D:\Olympus…\导师姓名\学生姓名缩写\日期\）并设定首个样品的主文件名

在window菜单选close all images，关闭先前打开的所有图像

在window菜单选default workspace，恢复默认窗口布局

若窗口最左边的扫描缩放zoom值不是1.00，请设置为1并回车。

若窗口最后series窗口启用了z-stack和timeseries，请将其设为off。

显微镜操作：

手持手柄处向后推开聚光镜支架，根据样品类型更换相应的载物台适配器。包括载玻片适配器、平皿适配器和无适配器（透明底细胞板），完成轻轻将聚光镜支架拉回原位。

将物镜切换到4x或10x，对焦后逐级切换到20x并调焦清晰和寻找视野

光源可选择明场、荧光。为保护样品信号不致淬灭，荧光观察过程中可随时按调焦器中间的圆形shutter键切断和恢复照明。

若要使用油镜：

在20x下找好视野后，直接切换为60x油镜。

在触屏控制器的stage面板中按set，记忆当前坐标，然后按escape回缩物镜。

移动载物台使物镜进入加油口，往物镜顶端添加数微升Olympus专用镜油。

按stage面板的go键，载物台会自动返回原坐标。然后按escape使镜头自动复位。

使用细调焦使图像清晰。注意：一旦使用了油镜，请避免切换回20x或40x物镜。

荧光通道设置和参数调整：

在界面左二窗口PMT setting中单击Dye&Detector Select进行荧光标记设定，双击添加或删除荧光标记，完成后系统会自动进行硬件设置。

将所有激光器的初始功率设定为1%，通过调整HV值提高信号灵敏度，注意HSD检测器的最高允许值为700，SD检测器的最高允许值为800，当HV值接近最高限值依然感觉信号不足时，应改用适当调高激光功率的办法。注意，HV超出最高允许值后信号质量将明显下降，表现为噪点增加，应提高激光强度补偿信号不足。若激光功率调到100%后信号依然不足，可适当调大pinhole。

预扫描操作：

预扫描时要养成使用Hi-Lo视图的习惯，确保图像不出现大面积的红色过曝点。

使用live、livex2或livex4按钮启动预扫描，它们的区别在于采用逐行、隔行或隔3行扫描方式加速预扫描帧率，获得不同的反馈速度，一般采用最高的live x4。

分别调整焦距和各项扫描参数使图像最佳。

预扫描模式下，可以通过双击图像中某细胞，使该细胞居中显示（此操作自动移动载物台），也可在图像窗口中用ctrl键+鼠标滚轮，进行微调焦（此操作自动移动z轴）

扫描操作：

预扫描完成后，按界面右侧Acquire窗口上方的LSM start按钮进行图像扫描。结果文件会以四位数后缀自动保存于初始设置的保存目录。若更换样品，扫描前重新设定主文件名。